세포 생물학_세포 실험 Cell Biology_Cell Thawing Protocol

Cell thawing protocol

 

FCS : DMEM media 500mL + NBCS 50mL + p/s (penicillin streptomycin) 5mL

 

1. 먼저 15mL conical tube에 FCS 배지를 9mL 정도 분주한다.

(풀어줄 cell 양이 1mL 이므로, 보통 vial에 1mL씩 들어있음)

 

2. -80℃ or 액체질소에 보관되어 있는 cell vial을 꺼내온 후 water bath에서 살짝 녹여준다.

(액체질소에서 꺼낼 때는 보안경과 장갑 착용 필수)

 

3. vial에 들어있는 cell을 조심스럽게 pipet으로 따서 15mL conical에 분주한다.

 

4. 원심분리 (1000rpm, 3min)

 

5. 그 사이 culture dish를 준비하고 뚜껑에  cell 종류, passage number, 날짜 등을 기록한다.

(passage 숫자는 보통 vial에 기록되어있음)

 

6. 각 culture dish에 FCS 배지를 10mL씩 분주한다.

 

7. 원심분리가 끝나면 200uL tip으로 조심스럽게 suction 하여 conical tube의 배지(상층액)를 제거한다.

 

8. 각 culture dish에서 5mL씩 딴 후, conical에 down되어있는 cell을 잘 풀어주고 (천천히)

 

9. 2개의 culture dish에 5mL씩 고루 분주한다.

 

10. culture dish에 분주 후 현미경으로 관찰하여 cell이 뭉치지 않았는지 잘 확인한다.

 

11. 37℃ temperature, 5% CO2 (이산화탄소) 배양기에 배양한다.